¹College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000, Xinjiang, CHINA
²Research institute of herbivorous livestock, Chongqing academy of animal sciences, Chongqing, CHINA
³College of Veterinary Medicine, Southwest University, Chongqing, CHINA
⁴Immunology Research Center, Medical Research Institute, Southwest University, Chongqing, CHINA DOI : 10.9775/kvfd.2021.26080 MiRNA-665/hedef gen çiftinin etkileşimi hakkında az sayıdaki rapor göz önüne alındığında, hematopoietik prostaglandin D sentaz (HPGDS) geninin 3"-kodlanmayan bölgesi (3"-UTR) için bir çift lusiferaz raportör gen vektörünün oluşturulması ve HPGDS"nin miR-665 regülasyonunun moleküler mekanizmasının aydınlatılması amaçlandı. HPGDS geninin 3"-UTR bölgesini hedefleyen miR-665"nin saptanması için biyoinformatik yazılım kullanıldı. Sentetik psiCHECK-HPGDS-w/m-3"-UTR"nin güvenilirliği, dual lusiferaz sindirim yöntemi ile belirlendi. Daha sonra miR-665 mimik/negatif kontrolün, koyun luteal hücreleri ile ayrı ayrı ko-transfeksiyonu yapıldı ve ardından lusiferaz aktivitesi ve HPGDS ekspresyonu tespit edildi. Sonuçlar, HPGDS için 3"-UTR yabanıl tip (psiCHECK2-HPGDS-w-3"UTR) ve mutant (psiCHECK2-HPGDS-m-3"UTR) ekspresyon vektörlerinin başarıyla oluşturulduğunu ve dual lusiferaz raportör gen analizi, relatif lusiferaz aktivite ekspresyonunun, blank/negatif kontrol grubuna kıyasla %52"lik bir düşüşle w-3"-UTR grubunda inhibe edildiğini ve farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğunu gösterdi (P<0.05). Luteal hücrelerde, blank/negatif kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, RT-PCR ve western blot deneyleri, miR-665-mimik grubunda miR-665"in aşırı ekspresyonunda HPGDS"nin daha düşük oranda eksprese olduğunu gösterdi. Ayrıca, sonuçlarımız yukarıda bahsedilen grupta ELISA testi kullanılarak P4 konsantrasyonunun önemli ölçüde arttığını gösterdi. Özetle, verilerimiz özellikle koyunların yumurtalık luteal dokusunda HPGDS"yi hedeflemede miR-665"nin işlevini ve moleküler mekanizmasını incelemek için güçlü destek sağlayarak, HPGDS"nin 3"-UTR yabanıl tip dual lusiferaz raportör gen vektörünün başarıyla oluşturulduğunu ve miR-665"in, koyun luteal hücre fonksiyonunu düzenlemede HPGDS"nin 3"-UTR bölgesi üzerinde hareket ederek geni hedefleyebildiğini doğruladı. Anahtar Kelimeler : 3