¹College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, CHINA DOI : 10.9775/kvfd.2020.24110 Bu çalışmada, bir erime eğrisi analizi yoluyla tek bir reaksiyonda Actinobacillus pleuropneumoniae ve Haemophilus parasuis enfeksiyonunu tanımlamak için bir dubleks SYBR Green gerçek zamanlı PCR analizi geliştirildi. Bu yöntemde, A. pleuropneumoniae Apx IV ve H. parasuis omp P2 geninin yüksek oranda korunmuş bölgelerinin amplifikasyonuna izin veren iki çift spesifik primer kullanıldı. Analizin duyarlılğını belirlemek için PMD - 19T plazmid kullanılarak sulandırma deneyleri gerçekleştirildi. Sonuçlar, A. pleuropneumoniae ve H. parasuis"in erime eğrilerinin Tm değerlerinin sırasıyla bu iki patojeni doğru şekilde ayırt edebilen 83.36±0.09ºC ve 76.48±0.17ºC olduğunu gösterdi. Diğer solunum sistemi patojenleri ile aralarında çapraz reaksiyon gözlenmedi, bu da iki primerin yüksek özgüllüğünü ortaya koydu. Testin saptama hassasiyeti, sıradan PCR yöntemlerinden daha yüksek olan 127 ve 96 kopya/μL idi. Bu hızlı teknik, A. pleuropneumoniae ve H. parasuis"in eşzamanlı tespiti için basit ve kullanışlı bir seçenek sunabilir;i söz konusu seçenek klinik örneklerin teşhisi ve epidemiyolojik araştırmalar için uygulanabilir ve cazip olacaktır. Keywords : Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, SYBR Green Ι, Real-Time PCR, Erime eğrisi