¹Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences· Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology, Ministry of Agriculture· National Center for Engineering Research of Veterinary Bio- Products, Nanjing 210014 CHINA
²Discipline: Microbiology, School of Life Sciences, University of KwaZulu-Natal, Private Bag X54001, Durban 4000, SOUTH AFRICA
³College of Veterinary Science, University of Nyala, Nyala, SUDAN DOI : 10.9775/kvfd.2018.21137 Bu çalışmanın amacı, Mycoplasma hyopneumoniae ve Mycoplasma hyorhinis"in aynı anda tespitinde TaqMan prob temelli, hassas, spesifik dubleks gerçek zamanlı PCR yönteminin geliştirilmesidir. FAM ve Teksas Kırmızısı ile işaretli spesifik primer ve problar M. hyopneumoniae p97 geni ile M. hyorhinis p37 geninin amplifikasyonu amacıyla dizayn edildi. Dubleks gerçek zamanlı PCR reaksiyon karışımları oluşturularak optimize edildi ve yöntemin hassasiyetliği, özgüllüğü ve tekrarlanabilirliği hesaplandı. Dubleks gerçek zamanlı PCR"ın hassasiyetliği hem M. hyopneumoniae hem de M. hyorhinis için 10 kopya/μL olarak bulundu. Diğer yaygın viral ve bakteriyel patojenler ile çapraz reaksiyon yoktu. Ct değerlerinin varyasyonlarının standart katsayısının konsantrasyonu %5"ten az olup iyi bir tekrarlanabilirliğe işaret etmekteydi. Bronkoalveoler lavaj sıvısı, nazal svablar, dokular ve hücre kültürü süpernatantlarını içeren klinik örnekler (n = 937) dubleks gerçek zamanlı PCR ile test edildi. Mycoplasma hyopneumoniae ve Mycoplasma hyorhinis"in aynı anda tespitinde dubleks gerçek zamanlı PCR oldukça yüksek hassasiyetliğe sahip olup klinik örneklerde tanı amacıyla kullanılabilir. Yöntem kısa zamanda uygulanabilmesi ve ekonomik olması sebebiyle hem M. hyopneumoniae hem de M. hyorhinis"in kontrolünde yeni bir yaklaşım olarak kullanılabilir. Keywords : Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma hyorhinis, Dubleks gerçek zamanlı PCR, Domuz, Tespit