¹Ministry of Agriculture and Forestry, Foot and Mouth Disease Institute, Cell Department, TR-06510 Ankara - TURKEY DOI : 10.9775/kvfd.2021.25993 Hücre hatları, farklı biyoteknolojik alanlarda çalışmak için elverişli in vitro modeller olup, saflıkları araştırma ve üretimlerde çok önemli bir rol oynar. Bu çalışmanın amacı, sığır dil dokusunu kullanarak saf hücre hatlarının oluşturulması için yeni bir yöntem oluşturmaktır. Mezbahadan alınan sığır dil dokusundan primer hücre kültürü hazırlandıktan sonra, 37°C"de 3-5 dak EDTA (%0.02) ile muamele edilen hücreler, fibroblastlar yüzeyden ayrılmaya başladığında, %20 FBS içeren 5 mL EMEM ortamında toplandı, santrifüjlendi ve %10 serum içeren EMEM ortamında yeni bir kültür kabına aktarıldı. Eski kültür kabında kalan hücreler 8 saat 5 mL DMEM (%10 FBS"li) ile inkübasyonu takiben, aynı işlem Na2EDDA (%0.01) ile uygulandıktan sonra hücreler, %20 FBS"li DMEM ile iki kez yıkandı ve bu defa %10 FBS ve 10ng/ml EGF içeren DMEM ile inkübe edildi. 48 saat sonra aynı işlemler tekrarlandı. Saf kültürlerde sitokeratin ve vimentin için spesifik monoklonal antikorlar kullanılarak doku orijini doğrulaması amacıyla immün boyama protokolü uygulandı. Sonuçlarımız, immünositokimyasal analize göre, saflaştırılmış fibroblast hücrelerinin vimentin pozitif olduğunu ve saflaştırılmış epitel hücrelerinin de sitokeratin pozitif gösterdiğini gösterdi. Sonuç olarak, bu çalışma, primer kültürler ya da karışık hücre kültürlerinden saf yeni hücre hatları oluşturmak için kolay, etkili ve verimli bir yöntem ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler : Primer hücre kültürü, Fibroblast hücre, Epitelyal hücre, Saf kültür