¹University of Veterinary and Animal Sciences, Faculty of Veterinary Science, Institute of Microbiology, 54000 Lahore, PAKISTAN
²Cornell University, College of Veterinary Medicine, Department of Population Medicine and Diagnostic Sciences, 14853 Ithaca, New York, UNITED STATES OF AMERICA
³Cornell University, College of Veterinary Medicine, Department of Population Medicine and Diagnostic Sciences, 14853 Ithaca, New York, UNITED STATES OF AMERICA
⁴The Islamia University of Bahawalpur, Faculty of Veterinary and Animal Sciences, Department of Microbiology, 63100 Bahawalpur, PAKISTAN DOI : 10.9775/kvfd.2022.28738 Clostridium perfringens toksinotip B, Pakistan"da kuzu dizanterisinin yapıcı etkenidir. Gen ekspresyonunun değerlendirilmesi için lokal izolatların toksin üretim potansiyelinin iyileştirilmesi gerekmektedir. Bu çalışma, C. perfringens toksinotip B lokal izolatlarını moleküler düzeyde doğrulamayı ve takiben çeşitli fiziksel ve kimyasal koşullar altında majör toksinlerin üretiminin iyileştirilmesini amaçlamıştır. İzolatlar mikrobiyolojik ve biyokimyasal testler ile tanımlanmış ve PCR ile doğrulandıktan sonra ,16S rRNA amplifiye geninin nükleotid dizilimi yapılmıştır. Bu nükleotid dizileri NCBI GenBank®"a gönderilmiş ve MW867097, MW867098, MW867099, MW867100 ve MW867101 erişim numaraları alınmıştır. Toksinotip B"nin doğrulanması, alfa, beta ve epsilon toksin genlerinin PCR ile amplifikasyonu ile gerçekleştirilmiştir. Başlıca toksinler çeşitli fiziksel (sıcaklık ve pH) ve kimyasal (zenginleştirilmiş klostridiyal besiyeri, Robertson pişmiş et besiyeri, yumurtalı et besiyeri, sıvı tiyoglikolat besiyeri ve demir süt besiyeri) koşullarda optimize edilmiştir. Robertson pişmiş et besiyerinde, pH 6.0"da ve 37°C"de daha konsantre hemolitik alfa toksin (21.45±0.53 HU/mL) ve epsilon toksin (16.57±0.19 HU/mL) ve daha konsantre sitotoksik beta toksin (18.65±0.34 HU/mL) üretilmiştir. Aynı koşullarda alfa (%14,27, %13,92, %13,67, %13,56, %13,45), beta (%12,43, %12,81, %12,39, %12,61 ve %13,07) ve epsilon (%13,93, %14,78, %14,28, %14,03 ve %13,25) toksinlerinin ELISA yüzdeleri daha yüksek saptanmıştır. Optimize edilmiş bu koşullar, C. perfringens toksinotip B"nin majör toksin gen ekspresyon çalışmalarında kullanılabilir niteliktedir. Keywords : Alfa, Beta, Clostridium perfringens toxinotype B, Epsilon, Gen ekspresyonu, Kuzu dizanterisi, Robertson