¹College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, CHINA
²Xinxiang Center for Animal Disease Control and Prevention, Xinxiang 453000, CHINA DOI : 10.9775/kvfd.2021.26202 Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis ve Pasteurelle multocida, domuz yetiştiriciliğinde yaygın solunum sistemi hastalıkları patojenleridir ve domuz endüstrisinde sekonder enfeksiyonlara ve ciddi ekonomik kayıplara neden olabilirler. Bu üç patojenin neden olduğu klinik semptomların çıplak gözle ayırt edilmesi güçtür ve miks enfeksiyonlar hastalıkların tanısını zorlaştırır. Bu çalışmada, A. pleuropneumoniae Apx IV, H. parasuis Omp P2 ve P. multocida PlpE gen bazında spesifik primerler tasarlandı. A. pleuropneumoniae, H. parasuis ve P. multocida için sırasıyla 157, 120 ve 305 bp amplifiye ürünler beklendi. Amplifiye fragment bir vektöre klonlanarak standart bir plazmit oluşturuldu. Kalıp olarak standart plazmit kullanılarak, A. pleuropneumoniae, H. parasuis ve P. multocida multipl SYBR Green I"in eşzamanlı tespiti için kantitatif bir floresan PCR yöntemi geliştirildi. Erime eğrisi analizi ile birlikte duyarlılık, özgüllük ve tekrarlanabilirlik de değerlendirildi. Sonuçlar, bu yöntemin, bu üç patojeni saptamada duyarlılığının 147, 145 ve 61 bakteri/μL olduğunu gösterdi. Üç spesifik Tm piki veren aynı erime eğrisinde diğer bakterilerle çapraz reaksiyon gözlenmedi ve yöntem iyi bir özgüllük ve tekrarlanabilirlik sergiledi. Bu yöntem, üç patojenin eşzamanlı tespiti için kullanılabilir ve böylelikle hastalıkların önlemesi ve tedavisi için etkili bir teşhis aracı niteliğindedir. Keywords : ctinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, SYBR Green I, Multipleks PCR