Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi 2020 , Vol 26 , Issue 2
Effects of RNase III rncS Gene Deletion on Stress Response, Biofilm Formation and Virulence of Listeria monocytogenes
Lixia WANG1, Mengfan QIAO1, Qingling MENG1, Jun QIAO1, Yehui WU1, Jing GUO1, Xifeng WANG1, Jie LI1, Xingxing ZHANG3, Xuepeng CAI4
1College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi, Xinjiang, 832003, CHINA
2School of Biological Engineering, Central South University, Changsha, Hunan, 410012, CHINA
3State Key Laboratory for Sheep Genetic Improvement and Healthy Production, Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science/Shihezi University, Shihezi, Xinjiang, 832000, CHINA
4State Key Lab of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou, Gansu, 730046, CHINA DOI : 10.9775/kvfd.2019.22932 Ribonükleaz III (RNase III), kodlama yapmayan RNA (ncRNA) seviyelerini düzenleyen önemli bir enzim sistemidir. Bu çalışmada, LM-ΔrncS gen silme suşu, gen örtüşme uzatma PCR (SOE-PCR) ve homolog rekombinasyon teknikleri ile incelendi. Çevresel stres tepkisi, biyofilm oluşumu ve virülans düzeyi belirlenerek silme suşu LM-ΔrncS ile ana suş LM EGD-e karşılaştırıldı. LM EGD-e ile karşılaştırıldığında, LM-ΔrncS"nin adapte olabilirliği 30°C/42°C, pH 9, %5 NaCl, %3.8 etanol ve %0.1 H202 stresi altında önemli ölçüde azaldı (P<0.05). LM-ΔrncS"nin biyofilm oluşturma kabiliyeti, LM EGD-e"ninkinden anlamlı olarak daha düşüktü (P<0.05). LM-ΔrncS"de, ncRNA SreA ve SbrA genlerinin transkripsiyon seviyeleri anlamlı derecede azaldı (P<0.05). RAW264.7 hücrelerinde LM-ΔrncS"nin adezyon ve invazyon oranı LM EGD-e"ninkinden anlamlı olarak daha düşüktü (P<0.01) ve RAW264.7 hücrelerinde LM-ΔrncS"nin hayatta kalması ve çoğalması da önemli ölçüde azaldı (P<0.05). Bunun yanısıra, InlA, hly, prfA ve SigmaB genlerinin transkripsiyon seviyeleri LM EGD-e"ninkinden anlamlı derecede düşüktü (P<0.05). BALB/c farelerinde LD-ΔrncS"nin LD50"si 1.49 logaritmik düzende arttırıldı ve farelerin hayatta kalma süresi LM EGD-e ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde uzadı. Ek olarak, karaciğer ve dalaktaki bakteri yükü ve patolojik hasar da belirgin şekilde azaldı. Bu çalışma, RNase III RncS"nin LM"deki çevresel stres tepkisi, biyofilm oluşumu ve virülansın düzenlenmesinde rol oynadığını doğruladı. Keywords : Listeria monocytogenes, RNase III rncS, Çevresel stres yanıtı, Biyofilm, Virulans