¹Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Cumhuriyet University, TR-58140 Sivas - TURKEY
²Faculty of Veterinary Medicine, Kyrgyz-Turkish Manas University, KG-720044, Bishkek-KYRGYZSTAN
³Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Bingol University, TR-12000 Bingol - TURKEY
⁴Veterinary Control Institute, TR-23200, Elazig - TURKEY
⁵Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Firat University, TR-2311, Elazig - TURKEY DOI : 10.9775/kvfd.2017.17995 Bu çalışmanın amacı, inek sütlerinde major mastitis patojenlerinin (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli and Mycoplasma bovis) saptanabilmesi için hızlı, basit ve spesifik bir DNA ekstraksiyon ve multipleks PCR yöntemi geliştirmektir. Kaliforniya mastitis testi (CMT) pozitif 200 süt örneğinin kültürü sonrasında S. aureus, S. agalactiae ve E. coli varlığı sırasıyla 45 (%22.5), 21 (%10.5) ve 11 (%5.5) örnekte saptandı. Çalışmada optimizasyonu yapılan DNA ekstraksiyon metodu ile elde edilen DNA örneklerinin mPCR analizi neticesinde S. aureus, S. agalactiae ve E. coli varlığı sırasıyla %26.5 (53/200), %12 (24/200) ve %6 (12/200) olarak belirlendi. Ticari DNA izolasyon kitiyle elde edilen DNA örneklerinde de yukarıdaki etkenlerin varlığı benzer oranda bulundu. Öte yandan süt örneklerinin hiçbirinde kültür veya mPCR ile M. bovis tespit edilmedi. Kültür ve mPCR sonuçları arasındaki fark istatistiki olarak önemli bulundu (P<0.001). Kültür sonuçları referens olarak kabul edildiğinde, optimize edilen mPCR"ın sensitivitesi ve spesifisitesi sırasıyla %100 ve %89.2 olarak hesaplandı. Bu sonuçlara göre; çalışmada kullanılan mPCR yöntemi sığır süt örneklerinde majör mastitis etkenlerinin hızlı, duyarlı, spesifik ve eş zamanlı tespit edilmesinde alternatif rutin teşhis metodu olarak kullanılabilir. Keywords : Mastitis, Majör patojenler, DNA izolasyonu, Multipleks PCR