¹Wuhu Overseas Students Pioneer Park, Wuhu, Anhui Province, 241000, CHINA
²Department of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei, Anhui Province, 230032, CHINA
³Anhui JiuChuan Biotech Co., Ltd, Wuhu, Anhui Province, 241007, CHINA
⁴Department of Pathology & Cell Biology, Columbia University, New York, 10032, USA DOI : 10.9775/kvfd.2017.17372 Bu sunuda rekombinant domuz interferon alfa (rPoIFN-α)"nın Escherichia coli-temelli ekspresyonu ve saflaştırma metodu rapor edilmiştir. PoIFN-α kodlayan sekansı pMD18-T vektör içine klonlandı ve sonrasında standart rekombinant DNA teknikleri kullanılarak pET-32a (+) vektör içine subklonlandı ve elde edilen plazmid BL21(DE3) kompetan hücreler içine nakledildi. İzopropil-β-D-1-tiogalaktopiyranosid (IPTG) ile uyarmanın ardından rPoIFN-α, bakteri lizatının süpernatantından basit iki basamaklı kromatografi işlemi (Ni2+ affinite kromatografi ve DEAE anyon değişim kromatografi) kullanılarak saflaştırıldı. rPoIFN-α 48 mg/L kültür oluşumu ve >95% homojenite ile saflaştırıldı. Ürün 6.09 izoelektrik puanına sahip olup bakteriyal endotoksin 1 EU/mg"dan daha azdý. N-ucu amino asit sekansý ve tripsin ile oluþturulan peptit haritasý rPoIFN-α"nın özgünlüğü hakkında ilave kanýt saðladý. rPoIFN-α"nın biyolojik aktivitesi HEp-2/ Vesicular Stomatitis Virus (VSV) titrasyon sisteminde 1.1×106 IU/mL olarak tespit edilirken spesifik aktivitesi 1.0×106 IU/mg"a ulaştı. Sonuç olarak, pET-32a (+) prokaryotik ekspresyon sistemi kullanılarak biyoaktif rPoIFN-α"nın çözünür formunun yüksek derecede ekspresyonu sağlandı. Keywords : Çözünür ekspresyon, Protein saflaştırma, Kalite Kontrol, Domuz interferon-α, Vesicular Stomatitis Virus (VSV)